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超聲分離微孔板中的細(xì)胞

發(fā)布時(shí)間:2020-9-22瀏覽量:15820

1927年,化學(xué)家Wood和Loomis認(rèn)可了強(qiáng)烈的高頻聲波在液體中傳播的影響。他們發(fā)表了有關(guān)超 聲對(duì)乳化,膠體分散,小而易碎的物體破碎以及紅色分餾的影響的觀察結(jié)果。 無需使用裂解酶或 去污劑的血球。 盡管他們的工作引起了人們的極大興趣,但直到1950年代中期,隨著高效壓電換 能器的大量生產(chǎn),大功率,低成本的超聲設(shè)備才變得可用于研究和工業(yè)應(yīng)用。

在高強(qiáng)度超聲應(yīng)用中使用壓電技術(shù)的兩個(gè)主要產(chǎn)品是超聲波清洗器和超聲液體處理器。 超聲波 清洗器對(duì)于其預(yù)期的應(yīng)用清潔效果非常好; 但是,它們的強(qiáng)度低,固定和不均勻會(huì)在一定程度 上限制其使用范圍。 另一方面,超聲波處理器具有更多用途,是需要可預(yù)測(cè)的高強(qiáng)度超聲波能 量的應(yīng)用的首選儀器。

超聲波處理器包括三個(gè)主要組件:超聲波電源(發(fā)生器),轉(zhuǎn)換器和探頭。

超聲電源將50/60 Hz的電壓轉(zhuǎn)換為高頻(20 kHz)電能。將該電壓施加到轉(zhuǎn)換器內(nèi)的壓電晶體上, 然后在此轉(zhuǎn)換為較小的機(jī)械振動(dòng)。轉(zhuǎn)換器的縱向振動(dòng)被探頭放大,并作為超聲波由交替的壓縮和 稀疏作用傳遞給液體。這些壓力波動(dòng)導(dǎo)致液體由于負(fù)壓而在稀疏階段破裂,從而形成數(shù)百萬個(gè)微 小的氣泡(腔)。當(dāng)波前通過且氣泡在壓縮階段受到正壓時(shí),它們會(huì)振蕩并最終增長(zhǎng)為不穩(wěn)定的 尺寸。最終,氣泡爆裂;產(chǎn)生數(shù)百萬個(gè)沖擊波和渦流,使其從坍塌部位向外輻射,并在爆炸部位 產(chǎn)生極端的壓力和溫度。盡管這種現(xiàn)象(稱為氣穴現(xiàn)象)持續(xù)了幾微秒,并且每個(gè)氣泡釋放的能 量很小,但累積的能量卻非常高。

由于這些年來開發(fā)的各種專用配件,超聲處理器現(xiàn)已在實(shí)驗(yàn)室中廣泛使用。 典型的應(yīng)用包括: 細(xì)胞和組織分解以獲取酶和代謝產(chǎn)物; 毒性研究; 樣品制備; 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA); 酶 學(xué)用于RNA,DNA和PCR標(biāo)記的蛋白質(zhì)純化:雜交; 受體結(jié)合研究; 脂質(zhì)體制劑; 微乳液 萃 取; 分解; 解散 催化化學(xué)反應(yīng); 和納米顆粒的生產(chǎn)。

用超聲波處理這些應(yīng)用程序比以前的程序在生產(chǎn)率上有了巨大的飛躍。 但是,該方法依賴于將單 個(gè)手持式超聲探頭手動(dòng)插入試管或孔中,因此在處理微孔板時(shí)變得費(fèi)力費(fèi)時(shí)。 為了解決這個(gè)問題, 幾年前設(shè)計(jì)了一種方法,該方法使用普通的超聲波清洗器或?qū)iT設(shè)計(jì)的用作超聲波清洗器的盤形反 應(yīng)池通過能量通過微孔板壁間接地處理樣品。 盡管目的是同時(shí)且相同地處理所有孔,但研究人員 對(duì)其再現(xiàn)性并不滿意。 這是由于以下事實(shí):微板壁和微板的組成部分吸收了大部分能量,制造商 之間的公差差異很大。

為了提高生產(chǎn)率并改善可重復(fù)性,Sonics&Materials,Inc.(康涅狄格州紐敦)于1982年推出了4 頭探針。 最近,為了滿足基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)室的高通量要求,該公司開發(fā)了另外兩個(gè)多頭探針。

為了重復(fù)性,至關(guān)重要的是每個(gè)細(xì)胞內(nèi)的強(qiáng)度要一致且可預(yù)測(cè)。 該公司已經(jīng)成功制造了四種元素 探針,已有20年的歷史。 然而,當(dāng)他們嘗試開發(fā)包含八種和二十四種頭的探針時(shí),原型的重復(fù)性 低于預(yù)期。 使用超聲波技術(shù),要振動(dòng)的區(qū)域越大,振幅均勻分布的可能性就越小。 在產(chǎn)生了許多 有限元分析(FEA)模型并在現(xiàn)場(chǎng)花費(fèi)了許多時(shí)間之后,該公司現(xiàn)在可以為研究人員提供可行的 省時(shí)工具,從而對(duì)工作量產(chǎn)生有利影響。 在組裝之前,檢查每個(gè)探針以確保其共振頻率和長(zhǎng)度在 公差范圍內(nèi)。 組裝完畢后,對(duì)多元素探頭通電并再次用光纖儀器進(jìn)行檢查,以確保每個(gè)探頭尖端 的偏移量均符合要求。

多元素探針由20 kHz磨頭和微尖端組成,這些微尖端設(shè)計(jì)用于一次處理4個(gè),8個(gè)或24個(gè)深孔樣品。 1.5-2.0 ml微管 和10ml試管。 典型的自動(dòng)化系統(tǒng)包含一個(gè)750W微處理器控制的超聲波處理器,一 個(gè)多頭探頭和一個(gè)x-y定位系統(tǒng)。 一個(gè)處理周期包括定位板,在預(yù)定的持續(xù)時(shí)間內(nèi)給超聲波通電, 沖洗探針以及重復(fù)該過程,直到所有樣品孔都被處理完為止。 該系統(tǒng)占用的空間極小,一旦啟動(dòng), 便可以無人值守運(yùn)行,直到所有印版都已處理完畢。 因?yàn)樘幚淼某掷m(xù)時(shí)間,強(qiáng)度水平和浸入深度 是高度可控的,所以轉(zhuǎn)移到每個(gè)孔中的能量本質(zhì)上是相同且可重復(fù)的,從而確保了協(xié)議重復(fù)性。

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